Expressão heteróloga de uma trans-sialidase de Trypanosoma cruzi por Trypanosoma rangeli

TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia.O Trypanosoma rangeli é um parasito hemoflagelado, com capacidade de infectar animais incluindo o homem, nas Américas Central e do Sul. Sua distribuição geográfica, reservatórios e vetores são compartilhados com o Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. As Trans-sialidases (TS) de T. cruzi estão relacionadas ao processo de interação, penetração do parasito na célula hospedeira e seu escape do vacúolo fagocítico. O T. rangeli possui alguns genes da família das TS, não possuindo nenhuma atividade catalítica como perfaz algumas TS de T. cruzi (TcTS). O objetivo do presente estudo foi realizar a expressão heteróloga da TcTS de T. cruzi em T. rangeli buscando a geração de uma ferramenta para estudos da interação celular patógeno-hospedeiro. Para tanto, a partir da construção plasmidial que possui o gene da TcTS de T. cruzi foi confirmada a expressão heteróloga da TcTS de T. cruzi por T. rangeli por western blot e por microscopia de fluorescência. Ainda que preliminares, foram realizados ensaios de atividade TS nos parasitos transfectados. Os resultados confirmaram a expressão heteróloga da TcTS de T. cruzi por T. rangeli, além de apontar que o parasito transfectado possui uma TS ativa.Trypanosoma rangeli is an hemoflagellate parasite, with ability to infect animals including humans, in Central and South America. Geographical distribution, reservoirs and vectors are shared with Trypanosoma cruzi, etiological agent of Chagas disease. The trans-sialidases (TS) of T. cruzi are related to the processes of interaction, penetration of the parasite in the host cell and its evasion from parasitophorus vacuole T. rangeli revealed to have genes similar to TS family members but with no catalytic activity has been proved so far, as TS of T. cruzi (TcTS). The goal of this study was to perform the heterologous expression of TcTS of T. cruzi by T. rangeli to generate a tool for the study of host-pathogen interaction. Heterologous expression of TcTS by T. rangeli was confirmed by western blot and by fluorescence microscopy using antibodies directed to the catalytic site and terminal repeats of TcTS (SAPA). Although preliminary, TS activity tests in transfected flagellate was performed. The results confirm the heterologous expression of TcTS of T. cruzi by T. rangeli, in addition to pointing out that the transfected parasite has an active TS

Direct and indirect immunofluorescence

A imunofluorescência é um valioso instrumento auxiliar no diagnóstico das dermatoses bolhosas autoimunes e desordens inflamatórias, uma vez que seus achados clínicos e histopatológicos podem não ser determinantes. Consiste em um método laboratorial factível, que requer profissionais técnicos experientes, e detecta imunocomplexos in situ e/ou circulantes, que podem estar envolvidos na patogênese de tais enfermidades cutâneas.Immunofluorescence is a valuable auxiliary diagnostic tool for autoimmune bullous diseases and inflammatory disorders, since their clinical and histopathologic findings may be inconclusive. It is a feasible laboratory method that requires experienced technicians and detects in situ and circulating immune deposits that may be involved in the pathogenesis of such skin diseases.CNP

Third brazilian consensus for autoantIbodies screening in HEp-2 Cells : historical perspectve, quality control and clinical associatons

O III Consenso Brasileiro para Pesquisa de Autoanticorpos em Células HEp-2 (FAN) objetivou discutir estratégias para controlar a qualidade do ensaio, promover a atualização das associações clínicas dos diversos padrões e avaliar as difculdades de implantação do II Consenso ocorrido no ano de 2002. Métodos: Nos dias 13 e 14 de abril de 2007 participaram do encontro em Goiânia pesquisadores e especialistas de diversos centros universitários e laboratórios clínicos de diferentes regiões do Brasil, com o propósito de discutir e aprovar as recomendações que visam a melhores padronização, interpretação e utilização do ensaio pelos clínicos. Foram convidados como ouvintes representantes comerciais de diferentes empresas produtoras de insumos para realização do teste de FAN. Resultados e conclusão: Dada a heterogeneidade de microscópios e reagentes disponíveis no mercado, o III Consenso enfatizou a necessidade do controle de qualidade em ensaios de imunofuorescência indireta. Foram também feitas algumas adequações na terminologia utilizada para classifcar os diferentes padrões. Finalmente, foi realizada uma atualização das associações clínicas com fnalidade de facilitar cada vez mais o melhor uso do ensaio pelos clínicos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACTThe Third Brazilian Consensus for Autoantibodies Screening in HEp-2 Cells (ANA) had as purpose the evaluation of diffculties in the accomplishment of the 2nd Consensus recommendations that took place in the year of 2002, the discussion of strategies for quality control of the assay and the discussion of an update of the clinical associations of the several immunofuorescent patterns. Methods: Several ANA experts from university centers and private laboratories in different areas in Brazil joined the workshop in Goiânia on 2007 April 13 and 14 with the purpose of discussing and approving the recommendations for standardization, interpretation and use of the test by physicians. Commercial representatives of different ANA slide brands were also invited as listeners to the workshop. Results and conclusion: The 3rd ANA Consensus emphasized the need for quality control in indirect immunofuorescent assays since there is a considerable heterogeneity of available microscopes and reagents. It also promoted adaptations in the previously approved terminology used to classify the different patterns and fnally updated the clinical associations of the several patterns with the purpose of providing guidance for interpretation of the assay by clinical pathologists and assistant physicians

Critical analysis of the antinuclear antibody test as tool in clinical practice

Due to its continuous evolving process the fluorescent antinuclear antibody test (ANA-HEp-2) has required constant update efforts from personal involved in performing and interpreting its results. The methodological advances have brought up a considerable improvement in the test's sensitivity and consequently a decrease in its specificity. This has resulted in an increasing number of positive tests in apparently healthy subjects. This fact contributes to embarrassing situations and implies in the necessity to seek for elements to help the involved professionals. Well-conducted studies and experience have shown that there are some peculiar features associated with the auto-antibodies in patients with autoimmune diseases that are not present in those observed in healthy subjects. The present review brings an approach on the most important points to be considered in the analysis and evaluation of an ANA test that might help the identification of patients with autoimmune disease. Titer and immunofluorescence pattern are important parameters in the evaluation of the significance of a positive ANA-HEp2 test and in the reflex demand for further tests for specific autoantibodies. In general non-autoimmune individuals present low titer ANA-HEp-2 and patients with systemic autoimmune diseases present moder ate or high titer ANA-HEp-2 tests. However, exceptions to this are normally observed in both contexts. The homogeneous and coarse speckled nuclear patterns are almost exclusively observed in patients with systemic autoimmunity. On the other hand, the nuclear dense fine speckled pattern is one of the most frequently observed patterns in non-autoimmune individuals with a positive ANA-HEp-2 test. The basic concepts of the National Consensus on Standardization of ANA-HEp-2 Report have helped Brazilian rheumatologists and pathologists in the correct interpretation of the great diversity of ANA-HEp-2 immunofluorescence patterns. Finally, it is important to consider the possible and alternative significance of a positive ANA test in patients without objective evidence of autoimmune diseases.A pesquisa de anticorpos contra antígenos celulares, tradicionalmente denominada FAN (fator antinúcleo) ou FAN-HEp-2, tem apresentado contínua evolução que requer dos profissionais envolvidos uma acurada e constante revisão sobre os paradigmas que norteiam a interpretação dos resultados obtidos. Os avanços metodológicos ocasionaram expressivo aumento na sensibilidade do teste e conseqüente diminuição de sua especificidade. Isto se verifica pelo crescente número de exames positivos em indivíduos aparentemente hígidos. Este fato tem criado situações desconfortáveis e muitas vezes angustiantes, sendo necessário buscar elementos para auxiliar os profissionais envolvidos. Estudos criteriosos e a experiência têm nos ensinado que há características peculiares usualmente associadas aos auto-anticorpos observados em pacientes auto-imunes e em indivíduos não auto-imunes. A presente revisão fornece uma abordagem sobre os pontos importantes para a correta valorização dos achados do teste do FAN-HEp-2 e que possam auxiliar na identificação de pacientes com doenças auto-imunes. Discute-se a importância do título e do padrão de imunofluorescência na valorização de um teste positivo e no desdobramento da pesquisa de auto-anticorpos específicos. Indivíduos não auto-imunes usualmente apresentam FAN-HEp-2 em títulos baixos, enquanto pacientes auto-imunes, geralmente, títulos médios ou altos. Entretanto, observam-se freqüentes exceções em ambos os contextos. Os padrões de fluorescência nucleares pontilhado grosso e homogêneo quase sempre se associam a um contexto de auto-imunidade sistêmica. Por outro lado, o padrão nuclear pontilhado fino denso é um dos mais freqüentemente observados em pessoas não auto-imunes com exame positivo de FAN-HEp-2. O Consenso Nacional para Padronização dos Laudos de FAN-HEp-2 tem desempenhado importante papel na melhoria da interpretação do exame de FAN-HEp-2 em nosso país. Finalmente, há que se considerar os possíveis e diversos significados de um teste positivo de FAN-HEp-2 em um paciente sem evidência objetiva de doença auto-imune.Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Fleury Medicina Diagnóstica Setor de ImunologiaUNIFESPSciEL

Definições para a padronização da pesquisa de auto-anticorpos contra constituintes do núcleo (FAN HEp-2), nucléolo, citoplasma e aparelho mitótico e suas associações clínicas

OBJECTIVE: The Second Brazilian Consensus on Antinuclear Antibodies (ANA) in HEp-2 Cells approved and extended the decision trees developed during the First Brazilian Consensus in order to also offer information about mixed patterns of fluorescence. METHODS: Since this test elicits reactions not only to nuclear autoimmune antigens but also to different cell compartments, new denominations for the test were approved. Results and CONCLUSIONS: These new denominations encompass variations on the autoantibody testing against the nucleus (ANA HEp-2), nucleolus, cytoplasm, and mitotic apparatus issue. Furthermore, major clinical associations were described for each immunofluorescent pattern, facilitating the interpretation of laboratory results in the clinical practice.OBJETIVO: O Segundo Consenso Brasileiro de Fator Antinuclear (FAN) em Células HEp-2 ratificou os algoritmos de decisão para leitura dos padrões do FAN na imunofluorescência indireta vistos na primeira edição do Consenso Brasileiro, adicionando ainda um novo algoritmo relacionado com os padrões mistos. MÉTODOS: Tendo em vista a habilidade do teste em detectar autoantígenos nos distintos compartimentos celulares, e não apenas no núcleo, propõe-se novas denominações para este exame laboratorial. RESULTADOS E CONCLUSÕES: Como novas denominações algumas sugestões foram igualmente aceitas, dentro do tema pesquisa de auto-anticorpos contra constituintes do núcleo (FAN HEp-2), nucléolo, citoplasma e aparelho mitótico. Foram abordadas as principais relevâncias clínicas com os padrões de FAN descritos, facilitando o melhor uso do ensaio pelo médico.FMUSPUNIFESPBio-Rad Laboratório BrasilHospital Geral de GoiâniaBiomédicaUniversidade Federal de UberlândiaUFMG HCPUCRS HCNew Life Produtos HospitalaresUniversidade Católica de GoiásFMUSP HC Laboratório CentralPatologista ClínicaFMUSP HCFrischmann Aisengart Unidad InmunologíaUniversidade Católica de Goiás Laboratório de Auto-ImunidadeExame Medicina LaboratorialFMUFG HC Laboratório de Imuno-Reumatologia e HLALab. Santa LuziaMedivax/BionHSPE/SPUniversidade Católica de Goiás Laboratório da Área de SaúdeFarmacêutica-BioquímicaUniv. Fed. Mato GrossoFMUFG Serviço de ReumatologiaHospital Durand Unidad InmunologíaLaboratório ClínicoUFRGS HCPA Serviço de ReumatologiaUERJ FCMUFMG FMHospital Universitário de Brasília Laboratório de ReumatologiaUNIFESPSciEL

Lentiviroses em pequenos ruminantes: principais métodos de diagnóstico.

bitstream/item/97441/1/DOC-107.pd

Hibridização genômica in situ em triticeae: um enfoque metodológico.

bitstream/CNPT-2010/40760/1/p-co270.pd

How to interpret and appropriately appreciate the antinuclear antibody test

The tradicional fluorescent antinuclear antibody test (ANA) has required constant update efforts from personel involved in performing and interpreting its results. The methodological advances have brought up a considerable improvement in the test s sensitivity and, consequentely, a decrease in its specificity. This has resulted in an increasing number of positive tests in apparently healthy subjects. However, there are some peculiar features associated with the auto-antibodies in patients with autoimmune diseases that are not present in those observed in healthy subjects. The objective of the present review is to bring an approach on the most important points to be considered in the analysis and evalution of an ANA test that might help in the identification of patients with autoimmune disease. Title and immunofluorescence pattern are discussed as important parameters and they are important in the evaluation of ANA and in the reflex demand for further tests for specific autoantibodies. The basic concepts of the National Consensus on Standardization of ANA-HEp-2 Report are posted. Finally, we explore the possible meanings of a positive ANA test in a patient without objective evidence of autoimmune disease.Atualmente, a pesquisa de anticorpos contra antígenos celulares, historicamente chamados de fator antinúcleo (FAN), tem requerido dos profissionais que trabalham (direta ou indiretamente) com o exame uma acurada e constante revisão dos paradigmas que norteiam a interpretação dos resultados obtidos. Os avanços metodológicos levaram a um aumento expressivo na sensibilidade do teste e, conseqüentemente, à diminuição de sua especificidade, fato comprovado pelo crescente número de exames positivos em indivíduos sabidamente hígidos. Há características peculiares, as quais usualmente são associadas aos auto-anticorpos observados em pacientes auto-imunes e em indivíduos não-auto-imunes. O objetivo desta revisão é trazer uma abordagem sobre os pontos importantes, para a correta valorização dos achados do teste do FAN, que possa auxiliar na identificação de pacientes com doenças auto-imunes. É discutida a importância do título e do padrão de imunofluorescência na valorização de um teste positivo e no desdobramento da pesquisa de auto-anticorpos específicos. Também é feita uma revisão dos conceitos do Consenso Nacional para Padronização dos Laudos de FAN-HEp-2. Finalmente, é oferecida uma discussão sobre os possíveis significados do teste positivo de FAN em um paciente sem evidência objetiva de doença auto-imune.Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Fleury Medicina Diagnóstica Setor de ImunologiaUNIFESPSciEL

Caracterização e correlação do fenômeno pró-zona com títulos de sororeatividade do VDRL e reação de imuno- fluorescência indireta em soros de pacientes com sífilis

AZEVEDO, Luciana Karla Araújo de, et al. Caracterização e correlação do fenômeno pró-zona com títulos de sororeatividade do VDRL e reação de imuno-fluorescência indireta em soros de pacientes com sífilis. Revista Brasileira de Análises Clínicas, Rio de Janeiro, v. 38, n. 2, p. 183-187, 2006.Introdução: Treponema pallidun é o agente etiológico da sífilis uma doença sexualmente transmissível. No imunodiag-nóstico dessa doença utilizam-se dois diferentes tipos de testes sorológicos. Inicialmente, as amostras são triadas qualitativamente e quantitativamente por um teste não treponêmico como o veneral disease research laboratory (VDRL) e, em seguida, os soros reagentes são testados para a detecção de anticorpos específicos para o Treponema pallidum, como a reação de munofluorescência indireta através do fluorescent treponemal antibody absorption assay (FTA-ABS). Objetivos e Metodologia: Avaliar através do VDRL quantitativo e qualitativo a sororeatividade de 40 pacientes com sífilis e comparar com a presença do fenômeno pro-zona e resultados obtidos pelo FTA-ABS. Resultados e Discussão: Os níveis de reatividade das amostras testadas pelo VDRL variaram de 1:2 a 1:256. O fenômeno pró-zona foi observado em 8/40 soros (20%) se correlacionando com altos títulos de reatividade na maioria dos casos. O FTA- ABS foi reagente em 39/40 amostras (97,5%) apresentando forte e moderada reatividade independente dos títulos obtidos pelo VDRL e a presença ou ausência do fenômeno pró-zona na maioria dos casos, demonstrando uma maior sensibilidade desse exame quando comparado com o VDRL. Conclusão: Nossos resultados mostraram a importância da realização do VDRL quantitativo e qualitativo na investigação seguida pelo FTA-ABS na investigação sorológica da sífilis. ABSTRACT: Introduction: Treponema pallidum is the aetiological agent of syphilis, a sexually transmitted disease and the serology is essential for screening and diagnosis. In the immunediagnosis of this disease, two different sorts of serological tests are used. First the sera are screened in a quantitative and qualitative manner by a nontreponemal test such as the veneral disease research labora- tory test (VDRL), then the reactive sera are tested for specific treponemal antibodies using the fluorescent treponemal antidody ab- sorption assay (FTA-ABS). Objecitves and Methodology: To evaluate, using quantitative and qualitative VDRL, the sera reactivity of 40 patients bearing syphilis and compare these results to presence of prozone phenomenon and FTA-ABS. Results and discussion: The levels of sera reactivity in the VDRL test ranged from 1:2 to 1:256. The prozone phenomenon was observed in 8/40 amples (20%) and was correlated with high levels of VDRL in most of the cases. The FTA-ABS test was reactive in 39/40 cases (97,5%) with strong and moderate fluorescence intensity in most of the samples and it was independent of the VDRL reactivity levels and the presence or ab- sence of prozone phenomenon in mos of the cases, demonstrating a higher sensibility of this method when compared to the VDRL test. Conclusion: Our results showed the importance of qualitative and quantitative VDRL assay in the serological investigation of syphilis